Partículas Lentivirales de Activación (h2) IRG1: sc-418001-LAC-2

El gen humano ACOD1 codifica IRG1 (gen 1 sensible a la respuesta inmunitaria), una enzima asociada a la mitocondria que cataliza la conversión de cis-aconitato en itaconato, conectando el ciclo del ácido tricarboxílico con la regulación inmunometabólica. La producción de itaconato impulsada por IRG1 modula la activación de los macrófagos, las respuestas al estrés oxidativo y electrófilo y la señalización inflamatoria mediante efectos sobre la respiración mitocondrial y las especies reactivas de oxígeno, con repercusiones posteriores en vías como Nrf2 y el metabolismo dependiente de la succinato deshidrogenasa. La actividad desregulada de ACOD1/IRG1 se ha implicado en la remodelación metabólica asociada a infecciones e inflamación y en la biología del microambiente tumoral, lo que refleja su papel en la interfase entre la inmunidad innata y el metabolismo celular. La edición génica de ACOD1 facilita estudios mecanísticos del flujo metabólico, los programas de citocinas y la función mitocondrial en modelos inmunitarios y oncológicos relevantes, utilizando lecturas transcriptómicas, metabolómicas y funcionales.

Las partículas de activación lentiviral IRG1 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ACOD1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IRG1 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ACOD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IRG1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ACOD1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.