Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IRF3 Double Nickase Plasmid (h): sc-417171-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IRF3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IRF3 Double-Nickase-Plasmid (h) und IRF3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IRF3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IRF3: sc-33641
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IRF3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-417171-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRF3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417171-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Der Interferon-Regulationsfaktor 3 (IRF3) ist ein ubiquitär exprimierter Transkriptionsfaktor, der frühe angeborene Immunantworten auf virale sowie zytosolische Nukleinsäure-Erkennung koordiniert. Nach Aktivierung downstream von Signalwegen der Mustererkennungsrezeptoren, darunter cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS und TLR3–TRIF, wird IRF3 durch TBK1/IKKε phosphoryliert, dimerisiert und transloziert in den Zellkern, um Typ-I-Interferone und interferon-stimulierte Gene zu induzieren. Über dieses Programm prägt IRF3 die antivirale Restriktion, die entzündliche Signalweg-Kreuzkommunikation mit NF-κB sowie zelluläre Stressfolgen wie Apoptose. Eine dysregulierte IRF3-Aktivität wurde mit einer fehlgeleiteten Interferon-Signalisierung in der Infektionsbiologie, autoinflammatorischen Phänotypen und Tumor–Immun-Interaktionen in Verbindung gebracht, was IRF3 zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien der angeborenen Immunität macht.
IRF3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IRF3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IRF3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IRF3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IRF3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.