IRF-7 Double Nickase Plasmid (h): sc-400450-NIC

Der Interferon-regulatorische Faktor 7 (IRF7) kodiert IRF-7, einen übergeordneten transkriptionellen Master-Regulator der Typ‑I‑Interferonantworten nachgeschaltet an Mustererkennungsrezeptoren wie RIG‑I‑ähnlichen Rezeptoren und Toll‑like‑Rezeptoren. Nach Aktivierung durch das Erkennen viraler Nukleinsäuren wird IRF‑7 phosphoryliert und in den Zellkern transloziert, wo er die Expression von IFN‑α/β und interferon-stimulierten Genen antreibt und so die angeborene antivirale Immunität sowie inflammatorische Signalwege prägt. IRF7 integriert Signale über TBK1/IKKε und kooperiert mit NF‑κB, um Zytokinnetzwerke zu koordinieren, die die Aktivierung von Immunzellen und die Antigenpräsentation beeinflussen. Eine fehlregulierte IRF7‑Aktivität wurde mit einer veränderten antiviralen Abwehr und aberranten Interferon-Signaturen in verschiedenen immunvermittelten Erkrankungen und entzündungsassoziierten Pathologien in Verbindung gebracht, was IRF7 zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien zur Kontrolle des Interferon-Signalwegs macht.

IRF-7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IRF7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IRF7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IRF7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IRF7-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.