IRF-7 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424785-ACT

Das murine Gen **Irf7** kodiert **IRF‑7**, einen zentralen Transkriptionsregulator der Typ‑I‑Interferonantworten, der die antivirale angeborene Immunität nachgeschaltet an Mustererkennungsrezeptoren wie RIG‑I‑ähnlichen Rezeptoren und Toll‑like‑Rezeptoren koordiniert. Nach Aktivierung integriert IRF‑7 Signale aus der TBK1/IKKε‑abhängigen Phosphorylierung und der anschließenden nukleären Translokation, um über die JAK‑STAT‑Achse Programme interferon‑stimulierter Gene zu induzieren. Die Irf7‑Aktivität prägt entzündliche Signalwege, die Antworten von dendritischen Zellen und Makrophagen sowie die Wechselwirkungen mit NF‑κB‑vermittelten Zytokinnetzwerken. Fehlregulierte, IRF‑7‑abhängige Interferon‑Signaturen sind relevant für Modelle viraler Anfälligkeit, chronischer Entzündung und autoimmunähnlicher Pathologie und unterstützen mechanistische Studien zu interferongetriebenen Krankheitsprozessen.

IRF-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Irf7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IRF-7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Irf7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Irf7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IRF-7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Irf7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IRF-7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IRF-7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Irf7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.