Partículas Lentivirales de Activación (h) IRF-1: sc-400551-LAC

El factor regulador de interferón 1 (IRF1) codifica IRF-1, un factor de transcripción específico de secuencia inducido por interferones de tipo I y tipo II que coordina programas génicos de la inmunidad innata y adaptativa. IRF-1 regula la presentación de antígenos, la restricción antiviral, la señalización de citocinas inflamatorias y los puntos de control del ciclo celular y la apoptosis mediante vías que incluyen la señalización JAK–STAT y las redes transcripcionales del elemento de respuesta estimulado por interferón (ISRE). Al modular la activación de macrófagos, la diferenciación de células T y la expresión del MHC, IRF-1 influye en la vigilancia inmunitaria y en las respuestas al estrés, que con frecuencia se ven alteradas en la infección, la autoinmunidad y la evasión inmunitaria asociada al cáncer. La actividad desregulada de IRF1 también se ha vinculado con respuestas alteradas al daño del ADN y con fenotipos supresores de tumores dependientes del contexto, lo que lo convierte en un nodo útil para el análisis mecanístico de vías.

Las partículas de activación lentiviral IRF-1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de IRF1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IRF-1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción IRF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IRF-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo IRF1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.