IRF-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400551-ACT

Das menschliche IRF1 kodiert den Interferon-Regulationsfaktor 1 (IRF-1), einen DNA-bindenden Transkriptionsfaktor, der Interferon- und Entzündungssignale integriert, um antivirale Abwehr, Antigenpräsentation und Entscheidungen über das Zellschicksal zu steuern. IRF-1 wirkt nachgeschaltet der JAK/STAT-Signalübertragung und kooperiert mit NF-κB sowie Mitgliedern der IRF-Familie, um die Transkription interferon-stimulierter Gene, Zytokin-Signalwege und Komponenten der MHC-Klasse-I-Prozessierung zu regulieren. Durch die Regulation von Immunüberwachung, Apoptose- und Wachstumskontrollprogrammen wird die IRF1-Aktivität häufig in Kontexten der Infektionsbiologie, von Tumor–Immun-Interaktionen und chronisch-entzündlichen Zuständen untersucht. Eine fehlregulierte IRF-1-Signalisierung wurde mit veränderten angeborenen und adaptiven Immunantworten sowie mit Änderungen der zellulären Empfindlichkeit gegenüber Stress und Zytokinstimulation in Verbindung gebracht.

IRF-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IRF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IRF-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IRF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IRF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IRF-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IRF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IRF-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IRF-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IRF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.