IRF-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400551-ACT

O gene humano **IRF1** codifica o fator regulador de interferon 1 (IRF-1), um fator de transcrição que se liga ao DNA e integra sinais de interferon e inflamação para controlar a defesa antiviral, a apresentação de antígenos e decisões de destino celular. O IRF-1 atua a jusante da sinalização JAK/STAT e coopera com o NF-κB e membros da família IRF para regular a transcrição de genes estimulados por interferon, vias de citocinas e componentes do processamento do MHC de classe I. Por meio da regulação de programas de vigilância imune, apoptose e controle de crescimento, a atividade de IRF1 é frequentemente estudada em contextos de biologia de infecções, interações tumor–imunidade e estados inflamatórios crônicos. A sinalização desregulada de IRF-1 tem sido associada a respostas imunes inata e adaptativa alteradas e a mudanças na sensibilidade celular ao estresse e à estimulação por citocinas.

IRF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRF-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRF-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRF-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRF-1 em células tumorais com expressão de IRF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.