IRE1β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424138

Übersicht

Ern2 kodiert die Inositol-requiring enzyme 1 beta (IRE1β), eine im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisierte transmembrane Kinase/Endoribonuklease, die als Stresssensor innerhalb der Unfolded-Protein-Response (UPR) fungiert. Bei ER-Stress trägt IRE1β über den regulierten IRE1-abhängigen RNA-Abbau sowie die Modulation des Spleißens der Xbp1‑mRNA zur ER-Homöostase bei und beeinflusst dadurch die sekretorische Kapazität, die epitheliale Differenzierung und inflammatorische Signalwege. In der Maus ist Ern2 besonders in mukosalen und sekretorischen Epithelien angereichert, wo es hilft, den Bedarf an Proteinfaltung mit Barriere- und Muzin-assoziierten Programmen zu koordinieren. Eine Fehlregulation von ER-Stresswegen unter Beteiligung von IRE1β ist relevant für Studien zu intestinalen Entzündungen, Defekten der Schleimschicht, Wirt‑Mikroben‑Interaktionen und Phänotypen metabolischen Stresses in epithelialen Geweben.

Das IRE1β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ern2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ern2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ern2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IRE1β-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ern2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IRE1β-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ern2-Exone abzielen, die für die IRE1β-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ern2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IRE1β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IRE1β CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ern2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IRE1β HDR-Plasmid (m) und IRE1β HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ern2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ern2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.