IRE1α Lentiviral Activation Particles (h): sc-400576-LAC

ERN1 kodiert das Inositol-requiring Enzyme 1 alpha (IRE1α), eine im ER ansässige transmembrane Kinase/Endoribonuklease, die als primärer Sensor fehlgefalteter Proteine und als zentraler Initiator der Unfolded-Protein-Response (UPR) fungiert. Bei ER-Stress oligomerisiert IRE1α und autophosphoryliert, wodurch RNase-Funktionen aktiviert werden, darunter das unkonventionelle Spleißen der XBP1-mRNA zur Bildung des Transkriptionsfaktors XBP1s sowie der regulierte IRE1-abhängige Abbau (RIDD) ausgewählter Transkripte, um die sekretorische Kapazität umzubauen. Diese Aktivitäten sind mit der Proteostase, dem Lipidstoffwechsel, der Autophagie und inflammatorischer Signalgebung verknüpft – unter anderem über UPR-Crosstalk mit Signalwegen wie NF-κB und JNK. Eine fehlregulierte ERN1/IRE1α-Signalgebung steht mit zellulären Stressanpassungen bei Krebs, in Kontexten metabolischer Erkrankungen, bei Neurodegeneration sowie bei der Differenzierung von Immunzellen in Zusammenhang und ist daher ein häufig genutzter Knotenpunkt für mechanistische Studien zur ER-Stress-Signalgebung.

IRE1α Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ERN1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

IRE1α Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ERN1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen IRE1α-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ERN1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.