Plásmido Doble Nickase (h) IRE1α: sc-400576-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)IRE1α consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IRE1α (h) y el plásmido de doble nickasa IRE1α (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ERN1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IRE1α Anticuerpo (B-12): sc-390960
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) IRE1α | sc-400576-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) IRE1α | sc-400576-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERN1 codifica la enzima 1 alfa dependiente de inositol (IRE1α), una quinasa/endoribonucleasa transmembrana residente en el RE que actúa como sensor principal de proteínas mal plegadas y como nodo central de la respuesta a proteínas desplegadas (UPR). Ante el estrés del RE, IRE1α se oligomeriza y activa el empalme mediado por RNasa del ARNm de XBP1 y la degradación regulada dependiente de IRE1 (RIDD), reconfigurando programas transcripcionales y translacionales que gobiernan la proteostasis, la capacidad secretora, la inflamación y la apoptosis. Mediante el crosstalk con las vías de señalización de PERK y ATF6 y la activación posterior de las rutas de JNK y NF-κB, ERN1 influye en la señalización inmunitaria innata y la adaptación metabólica. La actividad IRE1α–XBP1 desregulada se ha implicado en afecciones caracterizadas por estrés crónico del RE, incluidos programas de supervivencia de células cancerosas, neurodegeneración, diabetes y trastornos inflamatorios, lo que la convierte en un objetivo común de estudios mecanísticos.
IRE1α El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ERN1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ERN1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ERN1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ERN1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.