IRBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403810

Übersicht

RBP3 kodiert das interphotorezeptorale Retinoid-bindende Protein (IRBP), ein großes sezerniertes Glykoprotein, das von Photorezeptoren produziert wird, sich in der interphotorezeptoralen Matrix anreichert und Retinoide bindet. IRBP unterstützt die Homöostase des Sehzyklus, indem es den extrazellulären Transport und Austausch von 11-cis- und all-trans-Retinoiden zwischen Photorezeptoren und dem retinalen Pigmentepithel erleichtert und so zur Erholung der Phototransduktion sowie zum Schutz vor retinoidvermitteltem oxidativem Stress beiträgt. Über diese Funktionen beeinflusst IRBP den Retinoidstoffwechsel, den Lipid-/Retinoidtransport und extrazellulärmatrix-assoziierte Prozesse, die für die Netzhautfunktion entscheidend sind. Eine veränderte Expression oder Funktion von RBP3/IRBP wurde mit Phänotypen retinaler Funktionsstörungen in Verbindung gebracht und wird im Kontext degenerativer und entzündlicher Mechanismen von Augenerkrankungen untersucht.

Das IRBP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RBP3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RBP3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RBP3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IRBP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RBP3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IRBP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RBP3-Exone abzielen, die für die IRBP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RBP3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IRBP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom IRBP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RBP3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IRBP HDR-Plasmid (h) und IRBP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RBP3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RBP3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.