IRAK-4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416405-ACT

Interleukin-1-Rezeptor-assoziierte Kinase 4 (IRAK4) kodiert IRAK-4, eine Serin/Threonin-Kinase, die als proximale Signalplattform nachgeschaltet von MyD88-abhängigen Toll-like-Rezeptoren und Mitgliedern der IL-1-Rezeptorfamilie fungiert. Nach Rezeptoraktivierung unterstützt IRAK-4 die Assemblierung des Myddosoms und leitet Signale an TRAF6 und TAK1 weiter, was die Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege antreibt und die Transkriptionsprogramme für Zytokine und Chemokine prägt. Dieser Signalweg ist zentral für die angeborene Immunerkennung, inflammasom-assoziierte Antworten und die Wechselwirkungen mit Interferon-Signalnetzwerken. Eine dysregulierte IRAK4-Aktivität oder -Expression wurde mit aberranter inflammatorischer Signalübertragung und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht; eine veränderte Signalweg-Ausgabe wird in der Infektionsbiologie, bei Autoimmunerkrankungen und im Kontext hämatologischer Malignome untersucht.

IRAK-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IRAK4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IRAK-4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IRAK4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IRAK4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IRAK-4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IRAK4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IRAK-4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IRAK-4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IRAK4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.