IQGAP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406335

Panoramica

IQGAP3 (IQ motif contenente la proteina attivatrice della GTPasi 3) è una proteina di scaffold che coordina la segnalazione e la dinamica del citoscheletro accoppiando piccole GTPasi, fattori regolatori dell’actina e cascate di chinasi. Contribuisce alla progressione del ciclo cellulare, alla migrazione direzionale e al rimodellamento delle adesioni, integrando input provenienti da vie quali MAPK/ERK e la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho per plasmare programmi di proliferazione e motilità. Un’espressione deregolata di IQGAP3 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso studiata per la sua associazione con un’aumentata proliferazione, invasività e con alterazioni delle caratteristiche epitelio–mesenchimali. In quanto gene umano, IQGAP3 è ampiamente utilizzato come nodo per analizzare il controllo a livello di rete dell’organizzazione del citoscheletro e della segnalazione mitogenica in modelli meccanicistici di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IQGAP3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IQGAP3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IQGAP3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IQGAP3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IQGAP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IQGAP3 per lo studio della segnalazione di IQGAP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IQGAP3 critici per la funzione di IQGAP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IQGAP3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IQGAP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IQGAP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IQGAP3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IQGAP3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IQGAP3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IQGAP3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IQGAP3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.