IP3R-III Double Nickase Plasmid (h): sc-402138-NIC

Das humane ITPR3 kodiert IP3R-III, einen Ca²⁺-Freisetzungskanal der Membran des endoplasmatischen Retikulums, der durch Inositol-1,4,5-trisphosphat aktiviert wird, das nachgeschaltet der Phospholipase‑C‑Signalübertragung gebildet wird. Durch die Gestaltung der zytosolischen und organellären Ca²⁺-Dynamik reguliert IP3R-III die Kopplung von Erregung und Sekretion, die mitochondriale Bioenergetik, ER‑Stressantworten und die Apoptose über den Ca²⁺-Transfer an ER–Mitochondrien-Kontaktstellen. Der ITPR3-abhängige Calciumfluss integriert Signale von GPCRs und Rezeptor-Tyrosinkinasen mit Transkriptionsprogrammen und metabolischer Anpassung und beeinflusst so Entscheidungen über das Zellschicksal. Eine dysregulierte IP3R-III-Expression oder -Signalgebung wurde mit einer veränderten Calciumhomöostase in Kontexten der Krebsbiologie, der Epithelphysiologie und der inflammatorischen Signalübertragung in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt in Pathway-Studien unterstützt.

IP3R-III Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITPR3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITPR3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITPR3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITPR3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.