IP3R-I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400986

Übersicht

ITPR1 kodiert den Inositol-1,4,5-trisphosphat-Rezeptor Typ 1 (IP3R-I), einen Ca²⁺-Freisetzungskanal des endoplasmatischen Retikulums, der IP₃-Signale nachgeschalteter, an PLC gekoppelter Rezeptoren in zytosolische und mitochondriale Kalziumtransienten umsetzt. Der durch IP3R-I vermittelte Ca²⁺-Fluss reguliert die Kopplung von Erregung und Transkription, synaptische Plastizität, Sekretion und Apoptose und ist in Signalwege wie GPCR/RTK–PLCβ/γ–IP₃, Calmodulin/CaMK, Calcineurin–NFAT sowie die Kommunikation an ER–Mitochondrien-Kontaktstellen integriert. Die Aktivität von ITPR1 prägt die Kalziumhomöostase und Stressantworten und beeinflusst zelluläre Phänotypen wie neuronale Erregbarkeit, Autophagie und die Signalgebung der Unfolded-Protein-Response. Genetische Variation oder Fehlregulation von ITPR1 wurde mit neurologischen Störungen, darunter spinocerebelläre Ataxie-Phänotypen, in Verbindung gebracht und macht das Gen zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien der Kalziumsignalübertragung in menschlichen Zellen.

Das IP3R-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ITPR1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ITPR1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ITPR1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IP3R-I-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ITPR1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IP3R-I-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ITPR1-Exone abzielen, die für die IP3R-I-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ITPR1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IP3R-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom IP3R-I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ITPR1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IP3R-I HDR-Plasmid (h) und IP3R-I HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ITPR1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ITPR1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.