Integrin αX/ITGAX/CD11c CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421170-ACT

Itgax kodiert das Integrin αX (CD11c), das mit ITGB2 heterodimerisiert und so das Leukozytenintegrin αXβ2 (CR4) bildet. Dieses vermittelt die Adhäsion an iC3b-opsonisierten Oberflächen und trägt zur komplementabhängigen Phagozytose bei. CD11c wird besonders stark auf dendritischen Zellen, bestimmten Makrophagen-Subsets und weiteren myeloischen Populationen exprimiert und verknüpft Signale aus extrazellulärer Matrix und Komplement mit Zytoskelett-Umbau, Migration und der Bildung der immunologischen Synapse. Über das Outside-in-Signaling von Integrinen beeinflusst ITGAX Signalwege mit Src-Familien-Kinasen, Syk, PI3K und kleinen GTPasen, die Antigenaufnahme, intrazelluläres Trafficking und inflammatorische Genprogramme regulieren. Eine fehlregulierte, ITGAX-assoziierte myeloische Aktivierung und Antigenpräsentation wurden in Mausmodellen mit autoimmuner Entzündung, der Biologie chronischer Infektionen sowie dem Umbau des Tumor-Immun-Mikromilieus in Verbindung gebracht.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Itgax-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin αX/ITGAX/CD11c Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Itgax-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Itgax-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin αX/ITGAX/CD11c-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Itgax-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin αX/ITGAX/CD11c-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin αX/ITGAX/CD11c-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Itgax-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.