Particules Lentivirales d'Activation (h) Integrin αM/CD11b: sc-400563-LAC

ITGAM code l’intégrine αM (CD11b), qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β2 (CD18) pour former Mac-1/CR3, un important récepteur d’adhésion et de reconnaissance des motifs (pattern recognition) exprimé sur les cellules myéloïdes. CD11b régule l’adhésion des leucocytes, leur transmigration et la phagocytose en se liant à des ligands tels que les ICAM, iC3b et le fibrinogène, et en coordonnant une signalisation « outside-in » avec le remodelage du cytosquelette. Via la signalisation des intégrines et son interconnexion avec les voies du complément et de l’immunité innée, ITGAM influence les états d’activation inflammatoire, la production d’espèces réactives de l’oxygène et l’élimination de cibles opsonisées. Une activité et une expression d’ITGAM dérégulées sont impliquées dans l’inflammation d’origine immunitaire et la biologie des infections, ce qui en fait un marqueur fréquent et un nœud mécanistique central dans les études portant sur la fonction des cellules myéloïdes et l’infiltration tissulaire.

Les particules d'activation lentivirales Integrin αM/CD11b (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ITGAM dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Integrin αM/CD11b (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ITGAM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Integrin αM/CD11b. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ITGAM ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.