Integrin αM/CD11b Lentiviral Activation Particles (h): sc-400563-LAC

ITGAM kodiert Integrin αM (CD11b), das mit Integrin β2 (CD18) zu einem Heterodimer assoziiert und so Mac-1/CR3 bildet – einen wichtigen Adhäsions- und Mustererkennungsrezeptor auf myeloischen Zellen. CD11b reguliert die Adhäsion von Leukozyten, die Transmigration und die Phagozytose, indem es Liganden wie ICAMs, iC3b und Fibrinogen bindet und Outside-in-Signalgebung mit Zytoskelett-Umbau koordiniert. Über Integrin-Signale und Crosstalk mit Komplement- sowie angeborenen Immunwegen beeinflusst ITGAM inflammatorische Aktivierungszustände, die Produktion reaktiver Sauerstoffspezies und die Clearance opsonisierter Ziele. Eine fehlregulierte ITGAM-Aktivität und -Expression ist an immunvermittelten Entzündungen und der Infektionsbiologie beteiligt, weshalb es in Studien zur Funktion myeloischer Zellen und zur Gewebeinfiltration häufig als Marker und mechanistischer Knotenpunkt dient.

Integrin αM/CD11b Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ITGAM-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Integrin αM/CD11b Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ITGAM-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Integrin αM/CD11b-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ITGAM-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.