Integrin α8/ITGA8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402020-ACT

ITGA8 kodiert Integrin α8, eine α‑Untereinheit, die mit β1 ein Heterodimer bildet und als Laminin‑ und extrazelluläre‑Matrix‑bindender Rezeptor die Zell‑Matrix‑Adhäsion, die Organisation des Zytoskeletts und die Mechanotransduktion reguliert. Integrin α8/ITGA8 trägt zur Signalübertragung in Fokalkontakten und zu nachgeschalteten Signalwegen bei, an denen FAK/SRC, GTPasen der Rho‑Familie und MAPK beteiligt sind und die Zellmigration, Differenzierung und Gewebeumbau koordinieren. Es wird besonders in mesenchymalen und stromalen Kontexten untersucht, einschließlich der Nierenentwicklung und der Fibroblastenbiologie, wo veränderte integrinvermittelte Signalgebung die Ablagerung der extrazellulären Matrix und die Organmorphogenese beeinflussen kann. Eine dysregulierte ITGA8‑Expression oder Integrin‑Signalgebung wurde mit fibrotischen Phänotypen und dem Umbau des Tumormikromilieus in Verbindung gebracht und ist daher relevant für Untersuchungen zu Invasion, adhäsionsabhängigem Überleben und matrixgetriebenen Transkriptionsprogrammen.

Integrin α8/ITGA8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGA8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin α8/ITGA8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGA8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGA8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin α8/ITGA8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGA8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin α8/ITGA8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin α8/ITGA8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGA8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.