Integrin β5/ITGB5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401017-ACT

ITGB5 kodiert Integrin β5, einen transmembranen Adhäsionsrezeptor, der mit Integrin αV zu αVβ5 heterodimerisiert, extrazelluläre Matrixliganden mit dem Aktinzytoskelett verknüpft und dadurch Outside-in-Signale initiiert. Integrin β5 reguliert die Dynamik fokaler Adhäsionen, Zellmigration und Überleben über Signalwege wie FAK/SRC, PI3K–AKT und MAPK und übernimmt darüber hinaus Funktionen in der Endozytose sowie in der Wechselwirkung mit TGF-β-gesteuerten Programmen. Durch die Modulation von Zell–Matrix-Interaktionen und der Mechanotransduktion beeinflusst ITGB5 das Verhalten von Epithel- und Endothelzellen, das Trafficking von Immunzellen sowie das Remodelling des Tumormikromilieus. Eine dysregulierte ITGB5-Expression oder -Signalgebung wurde in verschiedenen Krankheitskontexten mit Invasion, Angiogenese, fibrosebedingtem Remodelling und metastatischen Phänotypen in Verbindung gebracht.

Integrin β5/ITGB5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGB5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin β5/ITGB5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGB5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGB5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin β5/ITGB5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGB5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin β5/ITGB5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin β5/ITGB5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGB5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.