Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin α5/ITGA5/CD49e: sc-400546-ACT

ITGA5 code l’intégrine α5 (CD49e), un récepteur d’adhérence transmembranaire qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β1 pour former le récepteur de la fibronectine α5β1. Ce complexe assure l’attachement des cellules à la matrice extracellulaire et une signalisation bidirectionnelle coordonnant l’assemblage des adhérences focales, le remodelage du cytosquelette d’actine et la mécanotransduction, en intégrant des signaux issus des voies FAK/SRC, PI3K–AKT et MAPK. En régulant la migration, la prolifération et la survie cellulaires, ITGA5 contribue à la morphogenèse tissulaire, à la réparation des plaies et aux réponses angiogéniques. Une expression ou une signalisation dérégulée d’ITGA5 est fréquemment étudiée dans des contextes d’invasion et de métastases tumorales, de fibrose et de remodelage inflammatoire, où des interactions cellule–matrice altérées induisent des phénotypes pathogènes.

Integrin α5/ITGA5/CD49e Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α5/ITGA5/CD49e Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α5/ITGA5/CD49e. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α5/ITGA5/CD49e au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α5/ITGA5/CD49e dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.