Integrin β4/ITGB4/CD104 Double Nickase Plasmid (h): sc-400573-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Integrin β4/ITGB4/CD104 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Integrin β4/ITGB4/CD104 Double-Nickase-Plasmid (h) und Integrin β4/ITGB4/CD104 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ITGB4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Integrin β4/ITGB4/CD104: sc-514426
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Integrin β4/ITGB4/CD104 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400573-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Integrin β4/ITGB4/CD104 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400573-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ITGB4 kodiert Integrin β4 (CD104), einen transmembranen Adhäsionsrezeptor, der sich überwiegend mit Integrin α6 zu α6β4 paart – einem zentralen Bestandteil von Hemidesmosomen, die Epithelzellen über Laminine mit der Basalmembran verbinden. Durch die Kopplung an Intermediärfilamente und das Zusammenspiel mit Fokaladhäsions- und Wachstumsfaktorsignalen reguliert ITGB4 Zellpolarität, Zytoskelettorganisation und Migration, mit nachgeschalteten Effekten auf PI3K–AKT-, MAPK- und Rho-GTPase-abhängige Signalwege. Eine veränderte ITGB4-Expression oder -Lokalisation ist in mehreren Karzinomkontexten mit gestörter epithelialer Integrität und erhöhter Invasivität assoziiert; pathogene Varianten sind zudem mit Blasenbildungs-Erkrankungen verbunden, bei denen die dermo-epidermale Adhäsion beeinträchtigt ist. Diese biologischen Eigenschaften machen ITGB4 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung adhäsionsabhängiger Signalgebung, epithelialen Remodelings und extrazellulärmatrixgetriebener Phänotypen.
Integrin β4/ITGB4/CD104 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITGB4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITGB4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITGB4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITGB4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.