Integrin β4/ITGB4/CD104 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400573-ACT

ITGB4 kodiert für Integrin β4 (CD104), einen transmembranen Adhäsionsrezeptor, der typischerweise mit Integrin α6 zu α6β4 heterodimerisiert. Dieses ist ein zentraler Bestandteil von Hemidesmosomen, die Epithelzellen an die lamininreiche Basalmembran verankern. Über die Kopplung an Intermediärfilamente und das Zusammenspiel mit fokalen Adhäsions- und Wachstumsfaktor-Signalwegen reguliert ITGB4 epitheliale Polarität, Migration, Überleben und Mechanotransduktion – mit nachgeschalteten Effekten auf Signalwege wie PI3K–AKT, MAPK sowie auf das Zytoskelett-Remodelling. Eine veränderte ITGB4-Expression oder -Lokalisation wird in verschiedenen Krankheitskontexten mit gestörter Zell–Matrix-Adhäsion, verstärktem invasivem Verhalten und einem Umbau epithelialer Barrieren in Verbindung gebracht. Da α6β4 Signale der extrazellulären Matrix mit intrazellulärer Signalübertragung verknüpft, wird es häufig in Studien zu adhäsionsabhängiger Signalgebung, EMT-assoziierten Programmen und Interaktionen mit dem Tumormikromilieu untersucht.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGB4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin β4/ITGB4/CD104 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGB4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGB4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin β4/ITGB4/CD104-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGB4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin β4/ITGB4/CD104-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin β4/ITGB4/CD104-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGB4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.