Plasmide Double Nickase (h) Integrin α2/ITGA2/CD49b: sc-400913-NIC

ITGA2 code l’intégrine α2 (CD49b), qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β1 pour former le récepteur du collagène/de la laminine α2β1, assurant l’adhésion cellule–matrice extracellulaire et la mécanotransduction. En se couplant à la signalisation de la focal adhesion kinase (FAK), aux kinases de la famille Src et au remodelage du cytosquelette dépendant des GTPases Rho, ITGA2 influence la migration, l’invasion et la survie cellulaires en réponse à la composition et à la rigidité de la matrice. Dans les plaquettes et d’autres types cellulaires, α2β1 soutient l’adhésion dépendante du collagène ainsi que la signalisation « outside-in » des intégrines, susceptible de moduler les états d’activation. Une expression dérégulée d’ITGA2 ou une signalisation anormale des intégrines sont fréquemment étudiées dans le contexte des interactions tumeur–stroma, du remodelage fibrotique, du trafic des cellules inflammatoires et de phénotypes associés à la thrombose.

Integrin α2/ITGA2/CD49b Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGA2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGA2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGA2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.