Integrin α10/ITGA10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404080-ACT

ITGA10 kodiert Integrin α10, eine kollagenbindende α‑Untereinheit, die typischerweise mit Integrin β1 zu einem Zelloberflächen‑Adhäsionsrezeptor dimerisiert, der besonders in mesenchymalen Zelllinien wie Chondrozyten angereichert ist. Durch die Kopplung der extrazellulären Matrix an das Aktinzytoskelett moduliert Integrin α10 die Bildung fokaler Adhäsionen und Mechanotransduktionswege unter Beteiligung der FAK/SRC‑Signalübertragung, nachgeschalteter MAPK‑Kaskaden sowie der von Rho‑Familien‑GTPasen regulierten Zytoskelettdynamik. Diese Prozesse beeinflussen Zellanhaftung, Migration und den Umbau der extrazellulären Matrix, wodurch ITGA10 für Studien zur Knorpelbiologie, Skelettentwicklung und zu Interaktionen zwischen Stromazellen und Matrix relevant ist. Veränderte integrinvermittelte Adhäsion und Kollagensignale werden zudem häufig im Kontext degenerativer Gelenkphänotypen und der Tumor‑Stroma‑Kommunikation untersucht, wo die Matrixbindung invasive Programme oder Überlebensprogramme prägen kann.

Integrin α10/ITGA10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ITGA10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Integrin α10/ITGA10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ITGA10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ITGA10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Integrin α10/ITGA10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ITGA10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Integrin α10/ITGA10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Integrin α10/ITGA10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ITGA10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.