Plasmide Double Nickase (m) Integrin β1/ITGB1: sc-421171-NIC

Le gène murin *Itgb1* code l’intégrine β1 (ITGB1), une sous-unité essentielle de récepteur d’adhérence qui s’hétérodimérise avec de multiples intégrines α pour médiatiser les interactions cellule–matrice extracellulaire. La signalisation d’ITGB1 coordonne l’assemblage des adhésions focales, le remodelage du cytosquelette et la mécanotransduction via des voies telles que FAK/SRC, PI3K–AKT et MAPK, influençant la migration, la prolifération et la survie. En régulant la dynamique d’adhérence épithéliale et mésenchymateuse, ITGB1 est au cœur de l’organisation tissulaire, du trafic des cellules immunitaires et de la réparation des plaies. Une activité d’ITGB1 et une signalisation d’adhérence dérégulées sont largement impliquées dans le remodelage inflammatoire ainsi que dans l’invasion et les métastases associées aux tumeurs, faisant d’*Itgb1* une cible fréquente des études fonctionnelles sur des phénotypes dépendants de l’adhérence.

Integrin β1/ITGB1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Itgb1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Itgb1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Itgb1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Itgb1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.