Plasmide Double Nickase (h) INSM1: sc-402424-NIC

INSM1 (insulinoma-associated 1) code un facteur de transcription à doigt de zinc qui agit comme un régulateur clé de l’engagement de la lignée neuroendocrine et de la différenciation. INSM1 module des programmes d’expression génique contrôlant la sortie du cycle cellulaire, la machinerie de sécrétion neuronale et endocrine, ainsi que la répression transcriptionnelle associée à la chromatine, en intégrant des signaux qui façonnent le développement endocrinien et neuronal. Son expression est normalement limitée aux tissus neuroendocriniens en développement, mais elle est fréquemment réinduite dans les néoplasmes neuroendocriniens, où elle sert de marqueur moléculaire largement utilisé de l’identité neuroendocrine. Les réseaux transcriptionnels centrés sur INSM1 recoupent des voies gouvernant l’état de différenciation et la prolifération, ce qui le rend pertinent pour des études mécanistiques de la biologie des tumeurs neuroendocrines et de la plasticité cellulaire.

INSM1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus INSM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de INSM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de INSM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de INSM1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.