Inhibin β-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421131
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Inhibin β-B Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Inhibin β-B-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Inhibin β-B: sc-376971
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Inhibin β-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-421131 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Inhbb kodiert Inhibin beta-B, eine Untereinheit der TGF-β-Superfamilie, die entweder Activin-B-Homodimere oder zusammen mit INHBA Activin-AB-Heterodimere bildet und dadurch die SMAD2/3-abhängige Transkription moduliert. Die Activin-Signalgebung reguliert die Gonadenentwicklung, die Follikulogenese sowie die Funktion von Sertoli- und Granulosazellen und steuert darüber hinaus die Zellproliferation, Differenzierung und den Umbau der extrazellulären Matrix. Bei der Maus wurde eine veränderte Inhbb-Aktivität mit reproduktiven Phänotypen und endokriner Dysregulation in Verbindung gebracht; zudem überschneidet sich dieser Signalweg mit entzündlichen und fibrotischen Programmen, indem er kontextabhängig die Zytokinexpression und den Gewebeumbau beeinflusst. Diese Eigenschaften machen Inhbb zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die Verschaltung des TGF-β/Activin-Signalwegs in der Entwicklungsbiologie und in krankheitsrelevanten zellulären Zuständen zu untersuchen.
Das Inhibin β-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Inhbb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Inhbb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Inhbb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Inhibin β-B-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Inhbb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Inhibin β-B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Inhbb-Exone abzielen, die für die Inhibin β-B-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Inhbb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Inhibin β-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Inhibin β-B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Inhbb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Inhibin β-B HDR-Plasmid (m) und Inhibin β-B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Inhbb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Inhbb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.