ING4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403707-ACT

ING4 (Inhibitor of Growth Family Member 4) kodiert ein nukleäres, tumorsuppressorähnliches Protein, das als chromatinassoziierter Regulator der Transkription fungiert. ING4 ist an histonacetylierungsassoziierten Komplexen beteiligt und beeinflusst Genexpressionsprogramme, die die Zellzykluskontrolle, Apoptose, DNA-Schadensantworten und zelluläre Seneszenz steuern, mit nachgewiesenem Crosstalk zur p53- und NF-κB-Signalgebung. Durch die Modulation inflammatorischer Transkriptionsausgaben und stressresponsiver Signalwege trägt ING4 dazu bei, abnorme Proliferation zu begrenzen, und reguliert Reaktionen auf genotoxischen und oxidativen Stress. Eine veränderte ING4-Expression oder -Funktion wurde in mehreren krebsrelevanten Kontexten mit onkogenen Phänotypen und dysregulierter inflammatorischer Signalgebung in Verbindung gebracht, was ING4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur epigenetischen Kontrolle macht.

ING4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ING4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ING4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ING4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ING4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ING4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ING4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ING4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ING4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ING4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.