INDOL1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403856-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das INDOL1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- INDOL1 Double-Nickase-Plasmid (h) und INDOL1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IDO2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
INDOL1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403856-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
INDOL1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403856-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Human IDO2 (INDOL1) kodiert ein Enzym der Indolamin-2,3-Dioxygenase-Familie, das den oxidativen Metabolismus von Tryptophan entlang des Kynureninwegs katalysiert und dadurch die lokale Verfügbarkeit von Aminosäuren sowie nachgeschaltete bioaktive Metaboliten beeinflusst. Durch die Regulation des Tryptophanabbaus kann IDO2 die Immun-Signalübertragung, das Redoxgleichgewicht und zelluläre Stressantworten beeinflussen – mit kontextabhängigen Auswirkungen auf die Funktion antigenpräsentierender Zellen und entzündliche Signalwege. Veränderte Aktivität des Kynureninwegs und eine veränderte IDO2-Expression wurden in Situationen chronischer Entzündung und Immunfehlregulation beschrieben und werden im Hinblick auf Zusammenhänge mit Tumor‑Immun‑Interaktionen und neuroinflammatorischen Prozessen untersucht. IDO2 ist daher ein hilfreicher Knotenpunkt, um die metabolische Kontrolle von Immunphänotypen und das Zusammenspiel von Signalwegen in menschlichen Zellmodellen zu analysieren.
INDOL1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IDO2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IDO2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IDO2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IDO2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.