IMPACT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421126

Übersicht

IMPACT (inositol-monophosphatase-Domäne enthaltend 1) kodiert ein konserviertes zytoplasmatisches Protein, das mit der Kontrolle der Translation und der zellulären Anpassung an die Nährstoffverfügbarkeit in Verbindung gebracht wird. In Säugerzellen wurde IMPACT mit der Modulation der integrierten Stressantwort assoziiert, einschließlich der Regulation des eIF2α-Signalwegs und stressinduzierter Translationsprogramme, die Proliferation und Überleben unter metabolischem Stress prägen. Über diese Zusammenhänge wird Impact in Kontexten untersucht, in denen Proteostase und Aminosäure-Sensing die neuronale Funktion, Entwicklung und Stressresilienz beeinflussen, und bietet damit einen molekularen Ansatzpunkt, um zu erforschen, wie translationale Kontrollpunkte zu krankheitsrelevanten Phänotypen beitragen.

Das IMPACT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Impact-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Impact-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Impact nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IMPACT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Impact-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IMPACT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Impact-Exone abzielen, die für die IMPACT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Impact-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IMPACT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IMPACT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Impact-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IMPACT HDR-Plasmid (m) und IMPACT HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Impact-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Impact-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.