IL-7R CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401536-ACT

Das humane IL7R kodiert die Interleukin-7-Rezeptor-Alpha-Kette (IL-7R/CD127), eine Untereinheit eines Zytokinrezeptors, die mit der gemeinsamen γ-Kette dimerisiert, um eine IL-7-abhängige Signalübertragung zu vermitteln, die für die Thymopoese, das Überleben peripherer T-Zellen und die homöostatische Proliferation essenziell ist. Die Bindung von IL-7 an IL-7R aktiviert JAK1/JAK3 und nachgeschaltete, STAT5-gesteuerte Transkriptionsprogramme, mit zusätzlicher Kopplung an PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege, die den Lymphozytenstoffwechsel und die Differenzierung mitprägen. Die Expressionsdynamik von IL7R hilft dabei, Lymphozytensubpopulationen und Immunaktivierungszustände zu definieren, und eine veränderte Regulation oder Signalübertragung von IL7R wurde mit Phänotypen der Immundysregulation sowie mit genetischen Assoziationsstudien zu Autoimmunität und entzündlichen Erkrankungen in Verbindung gebracht. Als Zelloberflächenrezeptor wird IL-7R häufig im Kontext von Rezeptortransport (Trafficking), Liganden-Antwort-Kinetik und der transkriptionellen Kontrolle der Festlegung von Immunzelllinien untersucht.

IL-7R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL7R-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-7R Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL7R-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL7R-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-7R-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL7R-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-7R-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-7R-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL7R-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.