IL-6 Double Nickase Plasmid (m): sc-421114-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IL-6 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IL-6 Double-Nickase-Plasmid (m) und IL-6 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Il6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IL-6: sc-32296
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-6 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421114-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-6 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421114-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Interleukin-6 (IL-6), kodiert durch das Mausgen *Il6*, ist ein pleiotropes Zytokin, das Akute-Phase-Reaktionen, die Differenzierung von Immunzellen und inflammatorische Signalübertragung über hämatopoetische und stromale Kompartimente hinweg koordiniert. IL-6 bindet an den IL-6R und den Korezeptor gp130 und aktiviert dadurch die JAK/STAT3-Signalgebung; zusätzlich besteht eine Kopplung an MAPK- sowie PI3K/AKT-Signalwege, die Überlebens-, Proliferations- und Stoffwechselprogramme prägen. Eine dysregulierte IL-6-Produktion wird häufig als mechanistischer Readout der Aktivierung des angeborenen Immunsystems und der Umgestaltung von Zytokinnetzwerken in Modellen chronischer Entzündung, Autoimmunität, Infektion und tumorassoziierter Inflammation verwendet. In Mausmodellen wird eine gezielte Beeinflussung von *Il6* oft eingesetzt, um Makrophagenpolarisierung, T‑Zell‑Effektorprogrammierung sowie das Zusammenspiel zwischen Entzündungssignalen und Gewebereparatur zu untersuchen.
IL-6 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Il6-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Il6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Il6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Il6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.