Particules Lentivirales d'Activation (h) IL-3Rα: sc-437304-LAC

IL3RA code pour la chaîne alpha du récepteur de l’interleukine‑3 (IL‑3Rα, CD123), une sous-unité de liaison au ligand qui s’associe à la chaîne bêta commune pour former un complexe récepteur à haute affinité et assurer la signalisation de l’IL‑3. La liaison à IL‑3Rα active en aval les voies JAK/STAT, PI3K/AKT et MAPK, qui régulent la prolifération, la survie et la différenciation des progéniteurs hématopoïétiques et des lignées myéloïdes. L’expression d’IL3RA contribue à définir des états cellulaires spécifiques au sein des cellules immunitaires et progénitrices, et elle est fréquemment étudiée dans les travaux portant sur la myélopoïèse aberrante et l’hématopoïèse maligne. En tant que composant d’un récepteur de surface, IL‑3Rα sert également de point d’ancrage moléculaire pour analyser la réponse aux cytokines, les décisions de destin cellulaire et le remodelage des réseaux de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales IL-3Rα (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de IL3RA dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IL-3Rα (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription IL3RA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de IL-3Rα. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif IL3RA ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.