IL-3Rα Double Nickase Plasmid (h): sc-437304-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IL-3Rα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IL-3Rα Double-Nickase-Plasmid (h) und IL-3Rα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IL3RA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-3Rα Double Nickase Plasmid (h) | sc-437304-NIC | 20 µg | $410.00 |
IL3RA kodiert die Alpha-Kette des Interleukin-3-Rezeptors (IL-3Rα, CD123), die ligandenbindende Komponente des IL-3-Rezeptorkomplexes, die mit der gemeinsamen Beta-Kette (CSF2RB) heterodimerisiert, um die Signalübertragung einzuleiten. Die Aktivierung von IL-3Rα unterstützt in hämatopoetischen Vorläuferzellen und Zellen der myeloischen Linie Programme für Überleben, Proliferation und Differenzierung, mit nachgeschalteter Aktivierung der JAK/STAT-, PI3K–AKT- und RAS–MAPK-Signalwege. Veränderte IL3RA-Expression wird genutzt, um fehlregulierte Zytokinsignalgebung, Linienfestlegung und die Homöostase von Immunzellen in Kontexten hämatologischer Erkrankungen zu untersuchen. Als Zelloberflächenrezeptor mit eingeschränkten Expressionsmustern wird IL-3Rα häufig als Marker und funktioneller Treiber in Modellen aberranter myeloischer Biologie und entzündlicher Signalgebung untersucht.
IL-3Rα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IL3RA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IL3RA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IL3RA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IL3RA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.