IL-27 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-434233-ACT

Maus-Il27 kodiert IL-27, ein heterodimeres Zytokin der IL-12-Familie, das über den WSX-1-(IL-27RA)/gp130-Rezeptorkomplex signalisiert und JAK/STAT-Signalwege aktiviert, insbesondere STAT1 und STAT3. IL-27 moduliert den Crosstalk zwischen antigenpräsentierenden Zellen und T-Zellen, indem es die Differenzierung von CD4+-T-Helferzellen prägt: Es unterstützt eine frühe Th1-Programmierung, begrenzt zugleich Th17-Antworten und fördert IL-10-assoziierte regulatorische Programme. Über diese immunregulatorischen Effekte beeinflusst IL-27 Entzündungsschaltkreise, die mit mukosaler Immunität, Autoimmunität und Wirtsabwehr verknüpft sind, und wird häufig im Kontext chronischer Entzündungen und tumorassoziierter Immunumgestaltung untersucht. Sein Signalweg überschneidet sich mit Interferon- und IL-6-ähnlichen Signalnetzwerken, die die Zytokinproduktion, Chemokinexpression und die Funktion von Effektorzellen koordinieren.

IL-27 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Il27-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-27 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Il27-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Il27-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-27-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Il27-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-27-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-27-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Il27-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.