IL-1RII CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421099

Übersicht

Il1r2 kodiert den murinen Interleukin‑1‑Rezeptor Typ II (IL‑1RII), ein atypisches Mitglied der IL‑1‑Rezeptorfamilie, das überwiegend als Köderrezeptor für IL‑1α und IL‑1β fungiert. Durch die Bindung von IL‑1‑Liganden ohne produktive Signalweiterleitung begrenzt IL‑1RII die Verfügbarkeit der Liganden für IL‑1R1 und dämpft nachgeschaltete inflammatorische Kaskaden, die andernfalls NF‑κB‑ und MAPK‑abhängige Transkriptionsprogramme aktivieren. Die Aktivität von IL‑1RII trägt zur Feinabstimmung der angeborenen Immunaktivierung, der Leukozytenrekrutierung und der Verstärkung von Zytokinnetzwerken in myeloiden und stromalen Kompartimenten bei. Eine veränderte IL‑1RII‑Expression oder -Abspaltung (Shedding) wurde mit fehlregulierten Entzündungsreaktionen in Verbindung gebracht, die für Modelle autoimmuner Entzündung, der Infektionsbiologie und von Gewebeschädigungen relevant sind.

Das IL-1RII CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Il1r2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Il1r2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Il1r2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IL-1RII-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Il1r2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IL-1RII-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Il1r2-Exone abzielen, die für die IL-1RII-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Il1r2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IL-1RII CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IL-1RII CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Il1r2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IL-1RII HDR-Plasmid (m) und IL-1RII HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Il1r2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Il1r2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.