IL-1RAcP Double Nickase Plasmid (h): sc-402026-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IL-1RAcP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IL-1RAcP Double-Nickase-Plasmid (h) und IL-1RAcP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IL1RAP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IL-1RAcP: sc-376872
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IL-1RAcP Double Nickase Plasmid (h) | sc-402026-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-1RAcP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402026-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes IL1RAP kodiert das IL‑1‑Rezeptor-Accessory-Protein (IL‑1RAcP), einen essenziellen Korezeptor für die Signalübertragung von Zytokinen der IL‑1‑Familie, darunter IL‑1α/IL‑1β über IL‑1R1 sowie IL‑33 über ST2. Nach Ligandenbindung unterstützt IL‑1RAcP den Aufbau des Rezeptorkomplexes und eine MyD88‑abhängige Signalübertragung, die IRAK/TRAF6‑Kaskaden aktiviert und dadurch die NF‑κB‑ und MAPK‑Signalwege sowie die Induktion proinflammatorischer Genprogramme auslöst. Über diese Signalwege trägt IL‑1RAcP zur Regulation der angeborenen Immunaktivierung, zur Rekrutierung von Leukozyten und zu Zytokin‑Verstärkungsschleifen bei. Eine fehlregulierte, IL1RAP‑assoziierte Signalgebung wurde mit chronischer Entzündung und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht; zudem wird IL1RAP im Kontext der Kommunikation zwischen Tumor und Mikroumgebung sowie der Biologie hämatologischer Malignome untersucht.
IL-1RAcP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IL1RAP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IL1RAP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IL1RAP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IL1RAP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.