IL-1ra CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401313

概要

ヒトのIL1RNは、インターロイキン1受容体アンタゴニスト（IL-1ra）をコードしており、分泌型の制御因子としてIL-1αおよびIL-1βのIL-1受容体タイプIへの結合を競合的に阻害することで、下流のMyD88依存性シグナル伝達を減弱させます。IL-1によるNF-κBおよびMAPK経路の活性化を抑制することで、IL-1raはサイトカイン産生、白血球の動員、急性期炎症応答を制御する転写プログラムを調節します。IL1RN活性の破綻は、自然免疫シグナルの異常や炎症の設定値（炎症閾値）の変化と関連しており、自己炎症、関節炎関連経路、ならびにより広範なサイトカインネットワーク制御の研究において重要です。IL1RNはまた、マクロファージ、上皮細胞、間質系コンパートメントにおけるインフラマソーム–IL-1軸のダイナミクスとフィードバック制御を解析するためのマーカーノードとしても用いられます。

IL-1ra CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるIL1RN遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、IL1RN内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、IL1RNのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IL-1raタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IL-1raシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、IL1RN欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IL-1raの機能に不可欠なIL1RNエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、IL1RNゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IL-1ra CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびIL-1ra CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、IL1RN遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IL-1ra HDRプラスミド（h）および IL-1ra HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIL1RNホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIL1RN標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。