IL-1ra CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401313

Übersicht

Humanes IL1RN kodiert den Interleukin-1-Rezeptorantagonisten (IL-1ra), einen sezernierten Regulator, der die Bindung von IL‑1α und IL‑1β an den Interleukin‑1‑Rezeptor Typ I kompetitiv hemmt und dadurch die nachgeschaltete MyD88‑abhängige Signalübertragung abschwächt. Indem IL‑1ra die IL‑1‑getriebene Aktivierung der NF‑κB- und MAPK‑Signalwege begrenzt, moduliert es Transkriptionsprogramme, die die Zytokinproduktion, die Rekrutierung von Leukozyten und akute inflammatorische Akutphasenreaktionen steuern. Eine dysregulierte IL1RN‑Aktivität steht mit abweichender angeborener Immun-Signalgebung und veränderten Entzündungsschwellen in Zusammenhang und ist daher relevant für Studien zu Autoinflammation, arthritisassoziierten Signalwegen und der umfassenderen Regulation von Zytokinnetzwerken. IL1RN wird außerdem als Marker‑Knoten verwendet, um die Dynamik der Inflammasom‑IL‑1‑Achse sowie Feedback‑Kontrollmechanismen in Makrophagen, Epithelzellen und stromalen Kompartimenten zu untersuchen.

Das IL-1ra CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des IL1RN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des IL1RN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von IL1RN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IL-1ra-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von IL1RN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IL-1ra-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf IL1RN-Exone abzielen, die für die IL-1ra-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere IL1RN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IL-1ra CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom IL-1ra CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des IL1RN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IL-1ra HDR-Plasmid (h) und IL-1ra HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von IL1RN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten IL1RN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.