IL-17 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-421092-ACT

Das murine Gen **Il17a** kodiert **IL-17A**, ein charakteristisches Effektorzytokin von **Th17-Zellen** und anderen angeboren-ähnlichen Lymphozyten, das die Rekrutierung von Neutrophilen und die antimikrobielle Abwehr an Barrieregeweben koordiniert. IL-17A signalisiert über **IL-17RA/IL-17RC** und aktiviert dadurch **NF-κB**-, **MAPK**- und **C/EBP**-gesteuerte Transkriptionsprogramme, die Chemokine wie **CXCL1/CXCL2** sowie entzündliche Mediatoren einschließlich **IL-6** und **G-CSF** induzieren. Dieser Signalweg ist mit **IL-23–STAT3**-Netzwerken verknüpft und wirkt synergistisch mit **TNF**- und **IL-1**-Familien-Signalen, um Gewebeentzündungen zu verstärken. Eine fehlregulierte IL-17A-Aktivität wird in Mäusen häufig genutzt, um entzündliche Schaltkreise zu modellieren, die für autoimmunähnliche Pathologien, die mukosale Immunbiologie und tumorassoziierte Entzündungen relevant sind.

IL-17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Il17a-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Il17a-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Il17a-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-17-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Il17a-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-17-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-17-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Il17a-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.