IL-13 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402777-ACT

Humanes IL13 kodiert Interleukin-13 (IL-13), ein sezerniertes Typ-2-Zytokin, das Immunantworten durch Signalübertragung über IL-13Rα1/IL-4Rα formt und dabei JAK–STAT6 sowie nachgeschaltete Transkriptionsprogramme aktiviert. IL-13 fördert die alternative Polarisierung von Makrophagen, die Metaplasie von Becherzellen, die Schleimproduktion und die Aktivierung von Fibroblasten und wird damit mit Gewebeumbau und Entzündungen an Barrieren in Verbindung gebracht. In hämatopoetischen und epithelialen Kontexten greift IL-13 in Th2-assoziierte Netzwerke ein und kann Antigenpräsentation sowie Chemokinexpression modulieren. Eine dysregulierte IL-13-Signalgebung ist an allergischer Atemwegsentzündung, Asthma, atopischer Dermatitis und fibrotischen Prozessen beteiligt, was IL13 zu einem geeigneten Knotenpunkt für mechanistische Studien der Typ-2-Immunität macht.

IL-13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL13-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL13-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL13-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-13-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL13-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-13-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-13-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL13-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.