Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-12Rβ1: sc-404602-ACT

IL12RB1 code la sous-unité bêta 1 du récepteur de l’interleukine-12 (IL-12Rβ1), une sous-unité de récepteur partagée par les voies de signalisation de l’IL-12 et de l’IL-23, principalement exprimée à la surface des lymphocytes T activés, des cellules NK et des cellules présentatrices d’antigènes. Après liaison des cytokines aux chaînes de récepteur partenaires, IL-12Rβ1 permet l’activation de la voie JAK-STAT, favorisant la production d’IFN-γ, la différenciation Th1 et la coordination des réponses immunitaires antimicrobiennes. Par son rôle au sein des réseaux de signalisation dépendants de l’IL-12/IL-23, IL-12Rβ1 contribue à modeler l’inflammation et l’immunité cellulaire, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la polarisation immunitaire induite par les cytokines. Les variations ou la dérégulation de cet axe sont fréquemment examinées dans le contexte de phénotypes d’immunodéficience, de susceptibilité aux pathogènes intracellulaires et de troubles immunitaires inflammatoires pertinents pour la biologie des maladies humaines.

IL-12Rβ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL12RB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-12Rβ1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL12RB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL12RB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-12Rβ1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL12RB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-12Rβ1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-12Rβ1 dans les cellules tumorales présentant une expression de IL12RB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.