IL-12Rβ1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404602-ACT

IL12RB1 kodiert die Interleukin-12-Rezeptor-Untereinheit Beta 1 (IL‑12Rβ1), eine gemeinsame Rezeptoruntereinheit für die Signalübertragung von IL‑12 und IL‑23, die vor allem auf aktivierten T‑Zellen, NK‑Zellen und antigenpräsentierenden Zellen exprimiert wird. Nach Bindung der Zytokine in Kombination mit den jeweiligen Partner-Rezeptorketten unterstützt IL‑12Rβ1 die Aktivierung des JAK‑STAT-Signalwegs und fördert so die IFN‑γ‑Produktion, die Th1-Differenzierung sowie die Koordination antimikrobieller Immunantworten. Über seine Funktion in IL‑12/IL‑23‑abhängigen Signalnetzwerken trägt IL‑12Rβ1 zur Ausprägung von Entzündungsreaktionen und zellulärer Immunität bei und stellt damit einen zentralen Knotenpunkt für Studien zur zytokingetriebenen Immunpolarisierung dar. Varianten oder Fehlregulationen dieser Achse werden häufig im Zusammenhang mit Immundefizienz-Phänotypen, erhöhter Anfälligkeit für intrazelluläre Erreger und entzündlichen Immunerkrankungen untersucht, die für die Biologie menschlicher Erkrankungen relevant sind.

IL-12Rβ1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL12RB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-12Rβ1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL12RB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL12RB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-12Rβ1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL12RB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-12Rβ1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-12Rβ1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL12RB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.