IKKγ Double Nickase Plasmid (h): sc-400274-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IKKγ Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IKKγ Double-Nickase-Plasmid (h) und IKKγ Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IKBKG abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IKKγ: sc-166398
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IKKγ Double Nickase Plasmid (h) | sc-400274-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IKKγ Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400274-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IKBKG kodiert IKKγ (NEMO), die regulatorische Untereinheit des IKK-Komplexes, die die Signalweiterleitung von upstream liegenden Rezeptoren mit der Phosphorylierung und dem Abbau von IκB-Proteinen koppelt und so NF-κB‑abhängige Transkriptionsantworten ermöglicht. Über Signale von TNFR, IL‑1R/TLRs, Antigenrezeptoren und zytosolischen Stresswegen trägt IKKγ zur Koordination der Expression inflammatorischer Gene, der angeborenen und adaptiven Immun-Signalgebung, von Zellüberlebensprogrammen sowie von Antworten auf DNA-Schäden bei. Eine Störung von IKBKG beeinträchtigt die Aktivierung des kanonischen NF‑κB‑Signalwegs und kann Zytokinnetzwerke, die Apoptose-Empfindlichkeit und die Barriere-/ektodermale Homöostase verändern. Varianten in IKBKG sind mit Phänotypen von Immundefizienz und ektodermaler Dysplasie verbunden; zudem ist eine fehlregulierte NF‑κB‑Steuerung in breitem Umfang für Mechanismen entzündlicher Erkrankungen und für Studien zur onkogenen Signalgebung relevant.
IKKγ Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IKBKG-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IKBKG abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IKBKG-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IKBKG-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.