IKK alpha CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400492-ACT

CHUK kodiert IKK alpha (IKKα), eine katalytische Untereinheit des IκB-Kinase-Komplexes, der vorgeschaltete Signale aus TNF‑Rezeptor‑, Toll‑like‑Rezeptor‑ und Antigenrezeptor-Signalwegen integriert, um NF‑κB‑abhängige Transkriptionsprogramme zu regulieren. IKKα ist für den nichtkanonischen NF‑κB‑Signalweg essenziell, indem es NFKB2/p100 phosphoryliert, und unterstützt die p52‑RelB‑Signalgebung, die Lymphorganogenese, die Differenzierung von Immunzellen und die Expression entzündungsassoziierter Gene beeinflusst. Über NF‑κB hinaus ist IKKα an Crosstalk mit MAPK‑ und interferonbezogener Signalübertragung beteiligt und wurde mit chromatinassoziierten Funktionen in Verbindung gebracht, die die Transkriptionskontrolle beeinflussen. Eine fehlregulierte CHUK/IKKα‑Aktivität ist mit aberranter Entzündung, Immundysfunktion und krebsrelevanten Signalnetzwerken assoziiert, was CHUK/IKKα zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien zur Signalwegregulation und stressresponsiven Transkription macht.

IKK alpha Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHUK-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IKK alpha Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHUK-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHUK-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IKK alpha-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHUK-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IKK alpha-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IKK alpha-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHUK-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.