Ikaros CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400530-ACT

IKZF1 kodiert Ikaros, einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der die Festlegung hämatopoetischer Zelllinien und die Differenzierung von Immunzellen koordiniert, mit zentralen Funktionen in der B‑Zell-Entwicklung und der T‑Zell-Reifung. Ikaros reguliert die Chromatinzugänglichkeit und weitreichende Genexpressionsprogramme, indem es an regulatorische Elemente bindet und mit Korepressor- sowie Chromatin-Remodeling-Komplexen interagiert, und formt so Transkriptionsnetzwerke, die Proliferation, Apoptose und Zytokinsignalgebung steuern. Eine veränderte IKZF1‑Aktivität oder -Expression ist mit Immundysregulation und der Biologie hämatologischer Erkrankungen assoziiert, weshalb IKZF1 ein breit untersuchter Knotenpunkt in Signalwegen ist, die die lymphoide Homöostase und Differenzierungszustände regulieren.

Ikaros Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IKZF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Ikaros Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IKZF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IKZF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Ikaros-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IKZF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Ikaros-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Ikaros-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IKZF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.