Plasmide Double Nickase (h) IK1: sc-402139-NIC

Le gène humain **KCNN4** code **IK1 (KCa3.1)**, un canal potassique **K+** activé par le **Ca2+** à conductance intermédiaire, qui couple les signaux cytosoliques de **Ca2+** à l’hyperpolarisation de la membrane et à l’efflux de **K+**. En modulant le potentiel de membrane et en favorisant l’entrée de **Ca2+**, IK1 influence la signalisation dépendante du calcium, la régulation du volume cellulaire et des programmes transcriptionnels en aval qui contrôlent la prolifération, la migration et l’activation des cellules immunitaires. L’activité d’IK1 est couramment étudiée dans des voies impliquant la régulation par **Ca2+/calmoduline**, l’entrée de Ca2+ dépendante de l’épuisement des stocks (SOCE) et le remodelage du cytosquelette. Une fonction dérégulée de **KCNN4/IK1** a été associée à des processus inflammatoires et immunomédiés, au remodelage vasculaire et à des comportements de croissance altérés dans divers types cellulaires, ce qui étaye sa pertinence pour la modélisation mécanistique des maladies.

IK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNN4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNN4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNN4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNN4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.