Plasmide CRISPR d'Activation (h) IK1: sc-402139-ACT

Le gène humain **KCNN4** code IK1 (KCa3.1), un canal potassique activé par le Ca2+ à conductance intermédiaire, qui couple les signaux intracellulaires de Ca2+ à l’hyperpolarisation membranaire et à une entrée soutenue de Ca2+. L’activité d’IK1 influence la régulation du volume cellulaire, le transport des chlorures et des programmes de transcription dépendants du Ca2+, soutenant des processus tels que l’activation, la prolifération et la migration des cellules immunitaires. Par ses effets sur le potentiel de membrane et la dynamique du Ca2+, **KCNN4** s’intègre à des réseaux de signalisation qui façonnent les réponses inflammatoires et les interactions stroma–immunité, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier des mécanismes impliqués dans l’auto-immunité, la fibrose et la biologie du microenvironnement tumoral.

IK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KCNN4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IK1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KCNN4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KCNN4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IK1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KCNN4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IK1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IK1 dans les cellules tumorales présentant une expression de KCNN4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.