Ihh Double Nickase Plasmid (h): sc-401466-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ihh Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ihh Double-Nickase-Plasmid (h) und Ihh Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IHH abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Ihh: sc-271101
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ihh Double Nickase Plasmid (h) | sc-401466-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ihh Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401466-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Indian hedgehog (IHH) kodiert Ihh, ein sezerniertes Morphogen, das über PTCH1/SMO signalisiert, GLI-Transkriptionsfaktoren aktiviert und während der Entwicklung Zellschicksalsentscheidungen reguliert. Ihh spielt zentrale Rollen bei der enchondralen Ossifikation, der Proliferation und Hypertrophie von Chondrozyten sowie der Koordination der Festlegung der Osteoblastenlinie; dabei ist es in Signalwege eingebunden, die die Produktion der extrazellulären Matrix und die Organisation der Wachstumsfuge steuern. In der Humanbiologie ist eine veränderte IHH-Signalgebung mit Defekten der Skelettmusterbildung und einer Fehlregulation der Hedgehog-Signalwegaktivität verknüpft, was IHH zu einem wichtigen Knotenpunkt für die Untersuchung von Morphogengradienten und Gewebehomöostase macht. Als Signalwegkomponente mit kontextabhängigen Outputs wird IHH häufig genutzt, um Hedgehog-getriebene Transkriptionsprogramme und Differenzierungsdynamiken zu analysieren.
Ihh Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IHH-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IHH abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IHH-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IHH-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.