IGFBP7 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-418272-ACT

IGFBP7 (insulinähnliches Wachstumsfaktor-bindendes Protein 7) ist ein sezerniertes, matrizelluläres Protein, das die IGF-/Insulinsignalgebung moduliert, indem es an IGFs bindet und mit Komponenten der extrazellulären Matrix interagiert, um die Ligandenverfügbarkeit und die Rezeptorbindung zu beeinflussen. Es trägt zur Regulation von Zelladhäsion, Seneszenz und Stressantworten bei und wurde mit der Biologie von Endothel- und glatten Muskelzellen in Verbindung gebracht, einschließlich Signalwegen, die das vaskuläre Remodeling und den Umsatz der extrazellulären Matrix steuern. Veränderungen der IGFBP7-Expression werden häufig in Kontexten von Fibrose, Entzündung und Remodeling des Tumormikromilieus beobachtet, wo IGFBP7 Proliferations-, Migrations- und Angiogeneseprogramme beeinflussen kann. Diese Eigenschaften machen IGFBP7 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Wechselwirkung von Wachstumsfaktor-Signalwegen und ECM-getriebenen Phänotypen in humanen Zellsystemen.

IGFBP7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IGFBP7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IGFBP7 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IGFBP7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IGFBP7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IGFBP7-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IGFBP7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IGFBP7-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IGFBP7-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IGFBP7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.