Plasmide CRISPR d'Activation (h) IGFBP2: sc-401076-ACT

IGFBP2 (protéine de liaison aux facteurs de croissance de type insuline 2) est un régulateur sécrété de la signalisation des IGF qui module la biodisponibilité ainsi que l’engagement des récepteurs par l’IGF‑I et l’IGF‑II, influençant l’activité en aval des voies PI3K/AKT et MAPK. Au-delà de la séquestration des ligands, IGFBP2 peut affecter les interactions cellule–matrice et la migration via des interactions avec des composants de la matrice extracellulaire et des processus associés aux intégrines, la reliant au contrôle de la prolifération, de la survie et de la différenciation. Une expression altérée d’IGFBP2 est rapportée dans de nombreux contextes pathologiques, en particulier en cancérologie, où elle est fréquemment associée à un comportement invasif, à une adaptation métabolique et à un remaniement des voies de signalisation. En tant qu’effecteur dépendant du contexte au sein des réseaux de signalisation des facteurs de croissance, IGFBP2 est largement étudiée comme un nœud moléculaire reliant des signaux extracellulaires à des programmes transcriptionnels et phénotypiques.

IGFBP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IGFBP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IGFBP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IGFBP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IGFBP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IGFBP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IGFBP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IGFBP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IGFBP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de IGFBP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.