Plasmide CRISPR/Cas9 KO IGF2BP2 (m): sc-435664

Présentation

Igf2bp2 code pour IGF2BP2, une protéine liant l’ARN qui reconnaît les transcrits modifiés par la N6‑méthyladénosine (m6A) et module la stabilité, la localisation et la traduction des ARNm. Par un contrôle post‑transcriptionnel de l’expression génique, IGF2BP2 influence des réseaux de signalisation métaboliques, notamment les voies de l’insuline/IGF et PI3K–AKT, affectant ainsi la croissance cellulaire, l’homéostasie énergétique et les réponses au stress. Dans des modèles murins et en génétique humaine, une activité altérée d’IGF2BP2 a été associée à des phénotypes métaboliques tels que la résistance à l’insuline et la susceptibilité au diabète de type 2, et une expression dérégulée est également rapportée dans divers contextes prolifératifs et inflammatoires. Ces caractéristiques font d’IGF2BP2 un nœud pertinent pour étudier les choix de destinée des ARN et la régulation dépendante de m6A dans des états cellulaires métaboliques et pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IGF2BP2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Igf2bp2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Igf2bp2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Igf2bp2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IGF2BP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Igf2bp2 pour l'étude de la signalisation de IGF2BP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Igf2bp2 essentiels à la fonction de IGF2BP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Igf2bp2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IGF2BP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IGF2BP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Igf2bp2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IGF2BP2 plasmide HDR (m) et le IGF2BP2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Igf2bp2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Igf2bp2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.