IFT88 Lentiviral Activation Particles (h): sc-404089-LAC

Humanes IFT88 kodiert eine zentrale Komponente des intraflagellären Transportkomplexes B (IFT‑B), der den anterograden Transport entlang des primären Ziliums antreibt und dadurch den Aufbau und die Aufrechterhaltung des Axonems sowie eine korrekte ziliäre Signalübertragung ermöglicht. Indem IFT88 die ziliumabhängige Signaltransduktion unterstützt, beeinflusst es Signalwege wie Hedgehog und andere an sensorische Rezeptoren gekoppelte Prozesse, die auf eine intakte Zilienstruktur und den Proteintransport angewiesen sind. Eine Störung oder Fehlregulation von IFT88 beeinträchtigt die Ziliogenese, verändert nachgeschaltete Transkriptionsprogramme und wirkt sich in zilientragenden Zelltypen auf die Kontrolle von Zellzyklus und Polarität aus. Entsprechend wird IFT88 häufig im Kontext von Ziliopathien, renalen und retinalen Phänotypen sowie Defekten in der Entwicklungssignalgebung untersucht, bei denen die Funktion des primären Ziliums eine zentrale Rolle spielt.

IFT88 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente IFT88-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

IFT88 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der IFT88-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen IFT88-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen IFT88-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.